細胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測細胞在凋亡過程中細胞核DNA 的斷裂情況,其原理是生物素(biotin)標記的dUTP 在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細胞中斷裂的DNA 的3‘-OH 末端,并可與連接了的辣根過氧化酶的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)特異結合,在辣根過氧化酶底物二氨基聯苯胺(DAB)的存在下,產生很強的顏色反應(呈深棕色),特異準確地定位正在凋亡的細胞,因而在普通顯微鏡下即可觀察和計數凋亡細胞;由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有
DNA 的斷裂,因而沒有3'-OH 形成,很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄
切片)和細胞樣本(細胞涂片)的凋亡原位檢測。
二、制作對照的方法
1 陰性對照的制作方法:在操作步驟4 所用到的反應液中不要添加TdT 酶,其余與實驗組步驟完全相同。
2 陽性對照的制作方法:組織樣本在蛋白酶K 處理PBS 浸洗后,細胞樣本在Triton X-100 處理PBS 浸洗
后,再加入100μL DNase I 反應液(10U DNase I,40mM Tris-HCl PH 7.9,10 mM NaCl,6mM MgCl2,10mM CaCl2)
(用戶自備)室溫處理10 min,其余步驟相同。
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