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技術(shù)文章

**熒光標(biāo)記

**熒光標(biāo)記技術(shù)（immunofluorescencetechnique）是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素，當(dāng)與其相對應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時(shí)，在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位，檢測出抗原或抗體。**熒光標(biāo)記技術(shù)始創(chuàng)于20世紀(jì)40年代初，1942年Coons等**報(bào)道用異氰酸熒光素標(biāo)記抗體，檢查小鼠組織切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗原。當(dāng)時(shí)由于異氰酸熒光素標(biāo)記物的性能較差，未能推廣使用。直至1958年Riggs等合成了性能較為優(yōu)良的異硫氰酸熒光黃（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）。Marshall等又對熒光抗體標(biāo)記的方法進(jìn)行了改進(jìn)，從而使**熒光技術(shù)逐漸推廣應(yīng)用。常用的熒光素有異硫氰酸熒光素和四甲基異氰酸羅達(dá)明。
根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的結(jié)合步聚的不同，**熒光標(biāo)記技術(shù)可分為直接法、間接法、補(bǔ)體法和雙重**熒光法四種。直接法是將熒光素標(biāo)記的特異性抗體直接與相應(yīng)的抗原結(jié)合，以檢查出相應(yīng)的抗原成分。間接法是先用特異性抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的抗體，再用熒光素標(biāo)記的抗特異性抗體（間接熒光抗體）與特異性抗體相結(jié)合，形成抗原一特異性抗體一間接熒光抗體的復(fù)合物。因?yàn)樵谛纬傻膹?fù)合物上帶有比直接法更多的熒光抗體，所以間接法要比直接法更靈敏一些。補(bǔ)體法是用特異性的抗體和補(bǔ)體的混合液與標(biāo)本上的抗原反應(yīng)，補(bǔ)體就結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上，再用抗補(bǔ)體的熒光抗體與之相結(jié)合，就形成了抗原一抗體一補(bǔ)體一抗補(bǔ)體熒光抗體的復(fù)合物。熒光顯微鏡下所見到的發(fā)出熒光的部分即是抗原所在的部位。補(bǔ)體法靈敏度高，適用于各種不同種屬來源的特異性抗體的標(biāo)記顯示。在對同一組織細(xì)胞標(biāo)本上需要檢測兩種抗原時(shí)，可進(jìn)行雙重?zé)晒馊旧磳煞N特異性抗體（例如抗A和抗B）分別以發(fā)出不同顏色的熒光素進(jìn)行標(biāo)記，抗A抗體用異硫氰酸熒光素標(biāo)記發(fā)出黃綠色熒光，抗B抗體用四甲基異硫氰酸羅明達(dá)標(biāo)記發(fā)出橙紅色熒光，將兩將熒光抗體按適當(dāng)比例混合后，加在標(biāo)本上（直接法）就分別形成抗原抗體復(fù)合物，發(fā)出黃綠色熒光的即抗A抗體結(jié)合部位，發(fā)出橙紅色熒光的即抗B抗體結(jié)合的部位，這樣就明確顯示出兩種抗原的位置。

半個(gè)多世紀(jì)以來，經(jīng)過許多學(xué)者不斷改進(jìn)和發(fā)展，使此項(xiàng)技術(shù)成為微生物學(xué)、**學(xué)、病理學(xué)及**組織化學(xué)中常用的一種**學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，使許多疑難腫瘤得到了明確診斷。

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