為了規(guī)范酶聯(lián)**診斷試劑的生產(chǎn)和質(zhì)量控制，制定本技術(shù)指導(dǎo)原則。

   本指導(dǎo)原則適用于應(yīng)用酶聯(lián)**法的第三類(lèi)診斷試劑（病原微生物）的生產(chǎn)和質(zhì)量控制，其他類(lèi)酶聯(lián)**診斷試劑參考本指導(dǎo)原則。國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門(mén)將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時(shí)組織修訂。

一、基本原則

（一）酶聯(lián)**診斷試劑生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。

（二）酶聯(lián)**診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)該通過(guò)《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。

（三）酶聯(lián)**診斷試劑在研制時(shí)，應(yīng)當(dāng)遵循科學(xué)、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。

（四）酶聯(lián)**診斷試劑生產(chǎn)過(guò)程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的**性方面的事宜。

（五）生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用**、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測(cè)有效。

二、原材料質(zhì)量控制

（一）主要生物原料

與診斷試劑的質(zhì)量*密切相關(guān)的生物原料主要包括各種生物活性抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類(lèi)、**類(lèi)等生物原科。這類(lèi)原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。一般應(yīng)按照工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；若購(gòu)買(mǎi)，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，必須進(jìn)行原料驗(yàn)證，并進(jìn)行補(bǔ)充申報(bào)。

主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：

1、外觀(guān)

肉眼觀(guān)察，大部分生物原料為澄清透明的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀；或者為白色粉末，不含有其他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

2、純度和分子量

主要經(jīng)SDS-PAGE電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測(cè)生物原料的分子量選擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般情況下，每個(gè)電泳道加樣量為5μg，同時(shí)用已知分子量標(biāo)準(zhǔn)作參照，采用合適的電泳電流和電泳時(shí)間；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量。作為診斷試劑用生物原材料，用銀染法染色后，純度一般都要大于90％；用考馬斯亮藍(lán)染色后，純度一般都要大于95％。

3、蛋白濃度

蛋白濃度可通過(guò)Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測(cè)；

4、效價(jià)

效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果，通過(guò)倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

5、功能性實(shí)驗(yàn)

功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。

（二）生物輔料

生物輔料指的是在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白保護(hù)劑??途的一類(lèi)生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料均應(yīng)按照《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》所規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢驗(yàn)，達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方應(yīng)用于生產(chǎn)。

生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定，不得隨意變更供應(yīng)商。

對(duì)于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制10％濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)**測(cè)定，均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。

對(duì)于標(biāo)記用酶，應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱(chēng)（如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠(chǎng)家的檢定方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。

（三）化學(xué)原材料

參照《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級(jí)別進(jìn)行檢驗(yàn)。主要的檢測(cè)指標(biāo)包括：溶液外觀(guān)、一般鹽類(lèi)檢測(cè)、溶液pH值檢測(cè)、溶解情況檢、干燥失重的檢測(cè)、熾灼殘?jiān)取?/div>